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多肽合成凯撒测试的试剂怎么配
作者:9159金沙游戏场发表时间:2024-01-31浏览量:315
多肽合成凯撒测试(Kaiser Test)是一种用于检测多肽合成反应中是否还有未反应的氨基酸的方法。这个测试的原理是利用氨基酸的α-氨基与氰酮反应生成深蓝色的化合物。下面是配制凯撒试剂的步骤:
1. 准备试剂:首先需要准备以下试剂,包括80%酚(Phenol)、无水乙醇、吡啶(Pyridine)和氰酮(Cyanogen bromide,BrCN)。这些试剂都可以在化学试剂商店购买到。
2. 配制酚乙醇溶液:将80%酚与无水乙醇按照体积比1:1混合,得到酚乙醇溶液。例如,可以取50毫升80%酚和50毫升无水乙醇混合。
3. 配制吡啶氰酮溶液:在通风橱中操作,将氰酮溶解在吡啶中,制成浓度为0.1M的溶液。注意,氰酮具有剧毒,操作时要佩戴好防护用品,避免直接接触皮肤和吸入。
4. 配制凯撒试剂:将酚乙醇溶液与吡啶氰酮溶液按照体积比5:1混合,得到凯撒试剂。例如,可以取50毫升酚乙醇溶液和10毫升吡啶氰酮溶液混合。
5. 保存和使用:将配制好的凯撒试剂保存在棕色试剂瓶中,避光保存。使用时,取适量试剂滴加到待测样品中,观察颜色变化。如果溶液变为深蓝色,说明样品中还有未反应的氨基酸;如果溶液颜色不变或变为浅黄色,说明氨基酸已完全反应。
需要注意的是,凯撒测试对某些氨基酸的敏感性较低,因此在某些情况下可能会出现假阴性结果。此外,氰酮具有剧毒,操作时务必小心谨慎。
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